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谈谈激光荧光共聚焦显微镜常规样品的制备要求

发布时间:2021-08-02      点击次数:45
  与传统显微镜相比,激光荧光共聚焦显微镜具有高分辨率,高灵敏度和高放大倍率。随着软件开发和应用技术的发展,激光共聚焦显微镜已成为形态学,分子细胞生物学,神经科学,药理学和遗传学领域的新一代强大的研究工具。
 
  一、通过激光荧光共聚焦显微镜进行样品制备:
 
  激光共聚焦显微镜样品制备是检测前的关键步骤。样品需要用荧光探针(单,双和三)标记。
 
  标本可以是固定的或活组织,或固定或活的贴壁培养。细胞应在共聚焦特殊培养皿或盖玻片,悬浮细胞,萼片或滴剂和盖玻片上培养,覆盖。
 
  样品最大厚度约1~2mm,盖玻片厚度应小于0.17mm,滑块厚度应在0.8~1.2mm之间,表面光滑,厚度均匀,并且没有明显的干扰荧光。固定样品通常用密封片密封,通常使用通过使用pH 8.5-9的PBS制备的甘油密封。

激光荧光共聚焦显微镜

 


 
  二、常规样品制备要求:
 
  ⒈染料的选择:由于激光共聚焦显微镜使用单波长激光作为光源,因此荧光染料的选择应基于激光共聚焦显微镜的激光波长。如果同一样品中有多种荧光染料,请尽可能考虑它们的发射波长。不要重叠并避免交叉颜色问题。
 
  ⒉样品载体的选择:
 
  一般的共焦显微镜高倍物镜是一种油镜。其数值孔径小,镜片与样品之间的工作距离不大于0.17mm。因此,如果观察样品是粘附细胞或组织切片,则可以使用普通负荷。
 
  幻灯片和盖玻片都可以。如果是悬浮细胞或悬浮颗粒,可以通过在专用于共聚焦显微镜的培养皿中携带样品来观察。
 
  ⒊密封片的选择:如果仅需要观察样品一次并且不太容易淬灭荧光,则可以使用一定浓度的甘油混合物来密封膜。如果样品需要放置一段时间并且需要多次使用,则应使用抗荧光淬火密封来减少荧光信号损失。
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