激光荧光共聚焦显微镜技术的主要应用范围

　　激光荧光共聚焦显微镜输出的激光通过照明针孔反射到物镜上，再通过分色镜，最后聚焦在样品表面。激光将与生物组织样品中的荧光物质相互作用，产生荧光。一些荧光信号将以与入射光路相反的方向通过物镜，然后进入分光镜，最后被检测器收集。由于针孔和样品焦平面之间的共轭关系，焦平面外的反射信号会被针孔过滤掉，这使得共聚焦显微镜具有一定的色谱能力。穿过针孔的荧光信号具有很强的色谱能力。同时，由于光线强度较弱，需要使用灵敏度高的光电探测器进行检测。光电倍增管可以将荧光信号放大并转换为电信号（光电探测器输出的电信号强度与荧光强度成正比），然后传输给计算机，计算机通过特定的处理方法将电信号转换为图像信息。

　　

　　激光荧光共聚焦显微镜技术的主要应用范围如下：

　　

　　1、组织和细胞中的荧光定量测定

　　

　　常用于单活细胞水平的定量分析，如原位杂交、肿瘤细胞凋亡观察、DNA损伤和修复。

　　

　　2、细胞间通讯的研究

　　

　　用于研究缝隙连接通讯在胚胎发生、生殖发育、神经生物学、肿瘤发生等过程中的基本机制和功能，也可用于鉴定对缝隙连接有潜在毒性的化学物质。

　　

　　3、细胞的物理和化学测定

　　

　　可以定量、定性、定时、定点地测定溶酶体、线粒体、内质网、细胞骨架、结构蛋白、DNA、RNA、酶、受体分子等细胞内特定结构的含量、组成和分布。

　　

　　4、细胞内钙离子和pH值的动态分析

　　

　　激光荧光共聚焦显微镜利用荧光探针和激光扫描共聚焦显微镜，可以测量活细胞内pH值和多种离子（Ca2+、K+、Na+、Mg2+）的浓度和变化。

　　

　　5、三维图像的重建

　　

　　6、荧光漂白恢复技术

　　

　　经过荧光漂白的细胞在荧光恢复过程中的变化，可以用来分析细胞的生物过程，如蛋白质的运输、细胞膜上受体的流动和大分子的组装。